感受态细胞制备及转化影响的主要因素：
（1）细胞的生长状态和密度。最好从－70℃或－20℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的培养物，而不要用已经多次转接，及贮存在4℃的培养菌液。细胞生长密度以每毫升培养液中的细胞数在5×107个左右为佳，即应用对数期或对数生长前期的细菌。菌体密度可通过测定培养液的OD600进行粗略的评价。对大肠杆菌TG1菌株，OD600为0.5时，细胞密度在5×107个/ml左右。（应注意OD600值与细胞数之间的关系随菌株的不同而有所不同）。密度过高或不足均会使转化率下降。
（2）质粒DNA的质量和浓度。用于转化的质粒DNA应主要是超螺旋态的，转化率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源DNA的量过多或体积过大时，则会使转化率下降。一般来说，DNA溶液的体积不应超过感受态细胞体积的5%，1ng的DNA即可使50μl的感受态细胞达到饱和。对于以质粒为载体的重组分子而言，分子量越大，转化效率相应降低。此外，重组DNA分子的构型与转化效率也密切相关，环状重组质粒的转化率较分子量相同的线性重组质粒高10～100倍，因此重组DNA大都构成环状双螺旋分子。
（3）试剂的质量。所用的CaCl2等试剂均需是最高纯度的，并用最纯净的水配制，最好分装保存于4℃。
（4）杂菌及杂DNA污染防控。所有操作均需要保证严格无菌；所有涉及器皿，如离心管，移液器所有各种规格的tip头，均需要使用新购买或专用的，并经过严格高压湿热灭菌；所有的试剂也需要严格灭菌并防止被其他的试剂，DNA等污染。尤其值得注意的是，除了保证无菌以外，还要特别保证所有操作流程，所有涉及器皿的洁净度。
（5）保证所有操作过程，大肠杆菌材料出去冰浴状态；离心机，所需要的试剂，用于分装的离心管可以提前预冷。
（1）容器和试剂准备：新灭菌离心管（储存感受态细胞），制备感受态试剂（使用前务必预冷）。
（2）从LB平板上挑取新活化的E. coli DH5α单菌落，接种于3～5ml LB液体培养基中，37℃下振荡培养12h左右，直至对数生长后期。将该菌悬液以1∶50～100的比例接种于100ml LB液体培养基中，37℃振荡培养2～3h至OD600＝0.5左右。
（3）将培养液转入离心管中，冰上放置10min，然后于4℃下3000 rpm离心10min。弃上清液，用预冷的0.05mol/L的CaCl2溶液10ml轻轻悬浮细胞，冰上放置15～30min后，4℃下3000 rpm离心10min。
（4）弃上清，加入4ml预冷含15%甘油的0.05mol/L的CaCl2溶液，轻轻悬浮细胞，冰上放置几min，即成感受态细胞悬液。
（5）感受态细胞分装成200μl的小份，贮存于－80℃可保存半年。
（6）将感受态细胞按照正常步骤进行转化操作，并分别涂布无抗，及常用的抗生素的单抗平板，过夜培养，根据形成单菌落检测感受态细胞的抗性。
（7）转化效率和抗性检测：将已知浓度的质粒按照一定稀释梯度转化感受态细胞，并在相应的平板上培养过夜，根据菌落数计算感受态转化效率。
转化子总数＝菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积／涂板菌液体积
转化频率（转化子数／mg质粒DNA）＝转化子总数／质粒DNA加入量(mg)
感受态细胞总数＝对照组２菌落数×稀释倍数×菌液总体积／涂板菌液体积
感受态细胞转化效率＝转化子总数／感受态细胞总数
【注意】
（1）制作感受态细胞时，应使用专用的玻璃器皿或塑料容器。由于微量的洗涤剂或污染物都可能降低感受态细胞的转化效率，因此在洗刷完用于制作感受态细胞的专用玻璃器皿或塑料容器后，最好用去离子水浸泡一晚，然后再充分洗净。
（2）制作感受态细胞时，所使用的菌种，不应使用4℃或常温保存的传代细菌。应使用－70℃保存的菌种，在LB/抗生素平板培养基上分级划线培养后，挑取单菌落。使用这种菌种制作的感受态细胞，能提高转化效率。
（3）培养感受态细胞制备用菌体时，OD600值的测定应随时进行，以使OD600值控制在0.35～0.5之间。如果OD600值超出此范围，可能降低感受态细胞的转化效率。
（4）用于感受态细胞制备的菌体培养停止后要立即处理，不要将培养液过长时间室温下放置，在冰中放置时也不要时间过长。
（5）感受态细胞的制备操作过程中，离心后弃上清时要尽量弃尽，否则会降低感受态细胞的转化效率。
（6）氯化钙溶液也可以依次使用Solution A、Solution B进行悬浮。
使用Solution A、Solution B悬浮沉淀时，要用手指轻轻弹动离心管管壁，禁止剧烈震荡操作。
Solution A（重悬液）：0.1M MgCl2-CaCl2溶液（0.08M MgCl2+0.02M CaCl2）
Solution B（冻存液）：0.1M MgCl2-CaCl2溶液+15%甘油（用Solution A配制）
（7）本实验需全程在冰浴下进行，反复冻融会使细菌细胞破裂。
（8）－80℃冰箱中可保存半年左右。但如果是在－20℃冰箱中，建议保存时间不要超过15d。
（1）从－80℃冰箱中取出感受态细胞，置于冰上解冻；加入待转化的质粒DNA或酶连产物，冰浴30min；同时打开水浴锅，调至42 ℃。
（2）冰浴完成后，从冰中取出含DNA的感受态细胞，42℃热激 90 s。然后迅速冰浴约1min。
（3）加入约800μL的无抗LB（可以事先置于37℃），然后在37℃，220～250 rpm下复苏40min。
（4）复苏完成后，4000 rpm离心5min收集细胞，然后用约100μl无抗LB重悬，涂布到相应的选择性LB平板上，过夜培养。如果感受态效率很高，也可以不用收集细胞，直接将复苏后的培养物取合适体积涂布相应平板。
【注意】以上所有步骤都需要保持无菌操作。